Durchflusszytometrie und Zellsortierung
Leitung
Unsere Forschung
Eine Zellsuspension wird im Zentrum eines Flüssigkeitsstroms hydrodynamisch fokussiert, so dass eine Zelle nach der anderen durch den Laserstrahl des Durchflusszytometers geleitet wird. Jede einzelne Zelle streut das Laserlicht und Fluoreszenzmarkierungen in oder auf der Zelle werden angeregt. Das Streulicht und die Fluoreszenz werden von Detektoren aufgefangen und durch die Analyse der Lichtstärke an jedem Detektor ist es möglich, unterschiedliche Zelltypen zu identifizieren oder funktionale Eigenschaften der Zellen zu messen. Durchflusszytometrie ermöglicht es gleichzeitig mehrere Parameter in tausenden Zellen pro Sekunde zu messen.
Wissenschaftler am HZI nutzen Durchflusszytometrie um:
- Oberflächenmarker-Moleküle und intrazelluläre Proteine, wie Zytokine oder Phosphoproteine zu immunotypisieren. Wir führen routinemäßig Färbungen mit zehn und mehr Farben durch, um regulatorische T-Zellen, B-Zellen oder NK-Zellen zu identifizieren und charakterisieren oder um die Zytokin-Produktionsprofile von T-Zellen zu analysieren.
- die Expression von fluoreszierenden Proteinen als Reportermoleküle in Zellkulturen oder Mikroorganismen zu analysieren.
- physiologische Vorgänge wie Apoptose, Zellzykus oder Kalciumfreisetzung zu analysieren.
Zellsortierung
Als Erweiterung der analytischen Durchflusszytometrie wird die Zellsortierung genutzt, um spezifische Zelltypen aus einer heterogenen Suspension zu isolieren. Die sortierten Zellen können für Zellkulturen, DNA-Analysen, RNA-Analysen, Mikroskopie oder Proteinextraktionen verwendet werden. Unter anderem werden hochreine Zellpopulationen von naïven oder regulatorischen T-Zellen, NK-Zellen oder andere Zelltypen des Immunsystems gewonnen, um in-vitro Assays oder adaptive Transferexperimente durchzuführen.
Eine häufige Anwendung ist die Sortierung sehr seltener Zellen, um von ihnen anschließend das Genexpressionsprofil zu bestimmen. Eine weitere Anwendung ist die Erzeugung stabiler Expressions-Zelllinien durch wiederholtes Sortieren von transfizierten Zellen.
Geräte
Uns stehen derzeit mehrere Durchflusszytometer mit unterschiedlichen Leistungen zur Verfügung.
Durchflusszytometer:
- BD LSR-II/Fortessa: 5 Laser (360, 405, 488, 561, 640nm), 18 Fluoreszenzfarben
- BD LSR-II: 3 Laser (405, 488, 633nm), 11 Fluoreszenzfarben
- BD FACSCanto, FACSCalibur and Accuri C6: 2 Laser (488, 633nm), 4-6 Fluoreszenzfarben
Zellsortiergeräte:
- BD FACSAria-II: 3 Laser (405, 488, 633nm), 9 Fluoreszenzfarben
- BD FACSAria-II SORP: 4 Laser (405, 488, 561, 640nm), 13 Fluoreszenzfarben
- BC MoFlo XDP: 4 Laser (405, 488, 561, 640nm), 9 Fluoreszenzfarben